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        放射性同位素物質(zhì)代放謝的研究

        2011-10-30 13:24:56

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        物質(zhì)代放謝的研究
          體內(nèi)存在著很多種物質(zhì),究竟它們之間是如何轉(zhuǎn)變的,如果在研究中應(yīng)用適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記物作示蹤劑分析這些物質(zhì)中同位素含量的變化,就可以知道它們之間相互轉(zhuǎn)變的關(guān)系,還能分辯出誰(shuí)是前身物,誰(shuí)是產(chǎn)物,分析同位素示蹤劑存在于物質(zhì)分子的哪些原子上,可以進(jìn)一步推斷各種物質(zhì)之間的轉(zhuǎn)變機(jī)制。為了研究膽固醇的生物合成及其代謝,采用標(biāo)記前身物的方法,揭示了膽固醇的生成途徑和步驟,實(shí)驗(yàn)證明,凡是能在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴]o酶A的化合物,都可以作為生成膽固醇的原料,從乙酸到膽固醇的全部生物合成過程,至少包括36步化學(xué)反應(yīng),在鯊烯與膽固醇之間,就有二十個(gè)中間物,膽固醇的生物合成途徑可簡(jiǎn)化為:乙酸甲基二羥戊酸膽固醇 又如在研究肝臟膽固醇的來(lái)源時(shí),用放射性同位素標(biāo)記物3H-膽固醇作靜脈注射的示蹤實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,放射性大部分進(jìn)入肝臟,再出現(xiàn)在糞中,且甲狀腺素能加速這個(gè)過程,從而可說(shuō)明肝臟是處理血漿膽固醇的主要器官,甲狀腺能降低血中膽固醇含量的機(jī)理,在于它對(duì)血漿膽固醇向肝臟轉(zhuǎn)移過程的加速作用。
        2.物質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究
          物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)相互轉(zhuǎn)化的規(guī)律是生命活動(dòng)中重要的本質(zhì)內(nèi)容,在過去的物質(zhì)轉(zhuǎn)化研究中,一般都采用用離體酶學(xué)方法,但是離體酶學(xué)方法的研究結(jié)果,不一定能代表整體情況,同位素示蹤技術(shù)的應(yīng)用,使有關(guān)物質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)的周期大大縮短,而且在離體、整體、無(wú)細(xì)胞體系的情況下都可應(yīng)用,操作簡(jiǎn)化,測(cè)定靈敏度提高,不僅能定性,還可作定量分析。在闡明核糖苷酸向脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)化的研究中,采用雙標(biāo)記法,對(duì)產(chǎn)物作雙標(biāo)記測(cè)量或經(jīng)化學(xué)分離后分別測(cè)量其放射性。如在鳥嘌呤核苷酸(GMP)的堿基和核糖上分別都標(biāo)記上14C,在離體系統(tǒng)中使之參入脫氧鳥嘌呤核苷酸(dGMP),然后將原標(biāo)記物和產(chǎn)物(被雙標(biāo)記GMP摻入的dGMP)分別進(jìn)行酸水解和層析分離后,測(cè)定它們各自的堿基和戊糖的放射性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們的兩部分的放射性比值基本相等,從而證明了產(chǎn)物dGMP的戊糖就原標(biāo)記物GMP的戊糖,而沒有別的來(lái)源,否則產(chǎn)物dGMP的堿基和核糖的比值一定與原標(biāo)記物GMP的兩部分比值有顯著差別。這個(gè)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明戊糖脫氧是在堿基與戊糖不分記的情況下進(jìn)行的,從而證明了脫氧核糖核苷酸是由核糖核苷酸直接轉(zhuǎn)化而來(lái)的,并不是核糖核苷酸先分解成核糖與堿基,堿基再重新接上脫氧杭核糖。無(wú)細(xì)胞的示蹤實(shí)驗(yàn)可以分析物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)化條件,例如以3H-dTTP為前身物作DNA摻入的示蹤實(shí)驗(yàn),按一定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)摻入后,測(cè)定產(chǎn)物DNA的放射性,作為新合成的DNA的檢出指標(biāo)。
        3.動(dòng)態(tài)平衡的研究
          闡明生物體內(nèi)物質(zhì)處于不斷更新的動(dòng)態(tài)平衡之中,是放射性同位素示蹤法對(duì)生命科學(xué)的重大貢獻(xiàn)之一,向體內(nèi)引入適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記物,在不同時(shí)間測(cè)定物質(zhì)中同位素含量的變化,就能了解該物質(zhì)在體內(nèi)的變動(dòng)情況,定量計(jì)算出體內(nèi)物質(zhì)的代謝率,計(jì)算出物質(zhì)的更新速度和更新時(shí)間等等。機(jī)體內(nèi)的各種物質(zhì)都在有大小不同的代謝庫(kù),代謝庫(kù)的大小可用同位素稀釋法求也。
        4.生物樣品中微量物質(zhì)的分析
          在放射性同位素示蹤技術(shù)被應(yīng)用之前,由于制備樣品時(shí)的丟失而造成回收率低以及測(cè)量靈敏度不高等問題,使得對(duì)機(jī)體正常功能起很重要作用的微量物質(zhì)不易被測(cè)定。近年來(lái)迅速發(fā)展、應(yīng)用愈來(lái)愈廣泛的放射免疫分析(radioimmunoassay)技術(shù)是一種超微量的分析方法,它可測(cè)定的物質(zhì)300多種,其中激素類居多,包括類固醇激素,多肽類激素,非肽類激素,蛋白質(zhì)物質(zhì),環(huán)核苷酸,酶,腫瘤相關(guān)的抗原,抗體以及病原體,微量藥物等其它物質(zhì)。
        5.最近鄰序列分析法(Nearest neighbour-sequence analysis method
          放射性同位素示蹤技術(shù),是分子生物學(xué)研究中的重要手段之一,對(duì)蛋白質(zhì)生物合成的研究,從DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白質(zhì)翻譯均起了很大的作用。最近鄰序列分析法應(yīng)用同位素示蹤技術(shù)結(jié)合酶切理論和統(tǒng)計(jì)學(xué)理論,研究證實(shí)了DNA分子中堿基排列規(guī)律,在體外作合成DNA的實(shí)驗(yàn):分四批進(jìn)行,每批用一種不同的32P標(biāo)記脫氧核苷三磷酸,32P標(biāo)記在戊糖5'C的位置上,在完全條件下合成后,用特定的酶打開5'CP鍵,使原堿基上通過戊糖5'C相連的32P移到最鄰近的另一單核苷酸的3'C上 。用最近鄰序列分析法首次提出了DNA復(fù)制與RNA轉(zhuǎn)錄的分子生物學(xué)基礎(chǔ),從而建立了分子雜交技術(shù),例如以噬體T2-DNA為模板制成[32P]RNA,取一定量T2-DNA和其它一些DNA加入此[32P]RNA中,經(jīng)加熱使DNA雙鏈打開,并溫育,用密度梯度離心或微孔膜分離出DNA-[32P]RNA復(fù)合體測(cè)其放射性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果只有菌體T2DNA能與該[32P]RNA
        形成放射性復(fù)合體。從而證明了RNADNA模板的堿基呈特殊配對(duì)的互補(bǔ)關(guān)系,用分子雜交技術(shù)還證實(shí)了從RNADNA的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象。此外,放射性同位素示蹤技術(shù)對(duì)分子生物學(xué)的貢獻(xiàn)還表現(xiàn)在:對(duì)蛋白質(zhì)合成過程中三個(gè)連續(xù)階段,即肽鏈的起始、延伸和終止的研究;核酸的分離和純化;核酸末端核苷酸分析,序列測(cè)定;核酸結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系;⑸RNA中的遺傳信息如何通過核苷酸的排列順序向蛋質(zhì)中氨基酸傳遞的研究等等。為了更好地應(yīng)用放射性同位素示蹤技術(shù),除了有賴于示蹤劑的高質(zhì)量和核探測(cè)器的高靈敏度外,關(guān)鍵還在于有科學(xué)根據(jù)的設(shè)想和創(chuàng)造性的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及各種新技術(shù)的綜合應(yīng)用。
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